A consensus document for the clinical management of invasive fungal diseases in pediatric patients with hematologic cancer and/or undergoing hematopoietic stem cell transplantation in Brazilian medical centers

ABSTRACT In the present paper we summarize the suggestions of a multidisciplinary group including experts in pediatric oncology and infectious diseases who reviewed the medical literature to elaborate a consensus document (CD) for the diagnosis and clinical management of invasive fungal diseases (IFDs) in children with hematologic cancer and those who underwent hematopoietic stem-cell transplantation. All major multicenter studies designed to characterize the epidemiology of IFDs in children with cancer, as well as all randomized clinical trials addressing empirical and targeted antifungal therapy were reviewed. In the absence of randomized clinical trials, the best evidence available to support the recommendations were selected. Algorithms for early diagnosis and best clinical management of IFDs are also presented. This document summarizes practical recommendations that will certainly help pediatricians to best treat their patients suffering of invasive fungal diseases.

FUNGEMIA CAUSED BY Candida SPECIES IN A CHILDREN'S PUBLIC HOSPITAL IN THE CITY OF SÃO PAULO, BRAZIL: STUDY IN THE PERIOD 2007-2010 / Fungemia por espécies de Candida em Hospital Pediátrico da cidade de São Paulo, Brasil: estudo no período de 2007 a 2010

Candidemia remains a major cause of morbidity and mortality in the health care environment. The epidemiology of Candida infection is changing, mainly in relation to the number of episodes caused by species C. non-albicans. The overall objective of this study was to evaluate the frequency of yeasts of the genus Candida, in a four-year period, isolated from blood of pediatric patients hospitalized in a public hospital of the city of São Paulo, Brazil. In this period, yeasts from blood of 104 patients were isolated and, the identified species of Candida by phenotypic and genotypic methods were: C. albicans (39/104), C. tropicalis (25/104), C. parapsilosis (23/104), Pichia anomala (6/104), C. guilliermondii (5/104), C. krusei (3/104), C. glabrata (2/104) and C. pararugosa (1/104). During the period of the study, a higher frequency of isolates of C. non-albicans (63.55%) (p = 0.0286) was verified. In this study we verified the increase of the non-albicans species throughout the years (mainly in 2009 and 2010). Thus, considering the peculiarities presented by Candida species, a correct identification of species is recommended to lead to a faster diagnosis and an efficient treatment.

Candidemia permance como a maior causa de morbidade e mortalidade em ambiente hospitalar. A epidemiologia de infecções por Candida vem se alterando, principalmente em relação ao número de episódios causados por espécies não-albicans. Este estudo teve como objetivo avaliar a frequência, em um período de quatro anos, de leveduras do gênero Candida isoladas de sangue de pacientes pediátricos internados em hospital público da cidade de São Paulo, Brasil. Neste período foram isoladas leveduras de sangue de 104 pacientes, e as espécies de Candida identificadas, por métodos fenotípicos e genotípicos, foram: C. albicans (39/104), C. tropicalis (25/104), C. parapsilosis (23/104), Pichia anomala (6/104), C. guilliermondii (5/104), C. krusei (3/104), C. glabrata (2/104) e C. pararugosa (1/104). Em todo período do estudo foi observada maior frequência de isolamento de C. não-albicans (63,55%) (p = 0,0286). Neste estudo verificou-se aumento das espécies não-albicans ao longo dos anos (principalmente em 2009 e 2010), assim, ressalta-se que correta identificação em nível de espécie é recomendável, para que isso acarrete diagnóstico rápido e tratamento eficaz.

Identificação e caracterização de genes diferencialmente expressos em hifas de Candida albicans / Identification and characterization of genes differentially expressed in hypha of Candida albicans

A transição morfológica de levedura para hifa é essencial para a virulência de Candida albicans. Esta transição envolve a expressão de genes hifa-específicos que estão sob o controle de fatores transcricionais. Para descobrir genes hifa-específicos utilizamos um método de triagem diferencial, onde clones de biblioteca de DNA genômico foram hibridizados com sondas de cDNA de levedura e hifa. Dois clones com aumento de expressão em hifa foram selecionados. O sequenciamento dos insertos destes clones permitiu a identificação de dois genes metabólicos importantes: CaHXT7 (high-affinity hexose transporter) e CaYLL34 (da família AAA ATPase). As regiões codificadoras completas destes genes foram caracterizadas e a análise das proteínas hipotéticas revelou que: (1) CaHxt7p tem um domínio de transportador de hexose e (2) CaYll34p tem dois domínios AAA ATPase, com possível papel na fusão de membranas e degradação de proteínas (por exemplo, a valosina humana). Este é o primeiro estudo que demonstra aumento de expressão de genes metabólicos em hifas de C. albicans. CaYLL34 foi inativado por mutagênese insercional, utilizando o cassete HisG-URA3HisG, gerando o mutante M61. Esta linhagem apresentou alterações morfológicas acentuadas como aumento de vacúolo, de tamanho celular e diminuição na taxa de indução de hifa em todas as condições analisadas. Estes resultados mostram que a diminuição parcial dos níveis de CaYll34p celular é suficiente para afetar a morfologia celular característica, porque somente um alelo foi inativado, enquanto o outro continua funcional. Ainda, a associação dos produtos de CaHXT7 e CaYLL34 com a formação de hifas torna estas proteínas potenciais alvos para desenvolvimento de novas drogas antifúngicas

Identification of genes differentially expressed in hyphae of Candida albicans

A transição morfológica de levedura para hifa é essencial para a virulência de Candida albicans. Esta transição envolve a expressão de genes hifa-específicos que estão sob o controle de fatores transcricionais. Para descobrir genes hifa-específicos utilizamos um método de triagem diferencial, onde clones de biblioteca de DNA genômico foram hibridizados com sondas de cDNA de levedura e hifa. Dois clones com aumento de expressão em hifa foram selecionados. O sequenciamento dos insertos destes clones permitiu a identificação de dois genes metabólicos importantes: CaHXT7 (high-affinity hexose transporter) e CaYLL34 (da família AAA ATPase). As ORFs completas destes genes foram caracterizadas e a análise das proteínas hipotéticas revelou que: (1) CaHxt7p tem um domínio de transportador de hexose e (2) CaYll34 tem dois domínios AAA ATPase. Este é o primeiro estudo que demonstra aumento de expressão de genes metabólicos em hifas de C. albicans. Ainda, a associação dos produtos de CaHXT7 e CaYLL34 com a formação de hifas torna estas proteínas potenciais novos alvos para drogas antifúngicas.

Identification of genes differentially expressed in hyphae of Candida albicans

The ability to switch from yeast to hyphal forms is essential for Candida albicans virulence. This morphological switch involves the expression of hyphal-specific genes under the control of transcriptional factors. To contribute to the discovery of hyphal-specific genes, we used a differential screening method where clones of a genomic DNA library were hybridized with yeast and hyphal cDNA probes. Two clones with increased expression in hyphae were selected for study. Sequencing these clones, we found that they encoded two important metabolic genes, CaHXT7 (high-affinity hexose transporter) and CaYLL34 (member of the AAA ATPase family). CaHXT7 and CaYLL34 ORFs were completely determined. Analyses of the putative proteins show that: (1) CaHxt7p has one hexose transporter domain and (2) CaYll34p has two AAA ATPase domains. These results show, for the first time, increased expression of metabolic genes in C. albicans hyphae. Also, because the proteins encoded by CaHXT7 and CaYLL34 may be necessary for the switching to hyphae, they could be new targets for antifungal drugs.

A transição morfológica de levedura para hifa é essencial para a virulência de Candida albicans. Esta transição envolve a expressão de genes hifa-específicos que estão sob o controle de fatores transcricionais. Para descobrir genes hifa-específicos utilizamos um método de triagem diferencial, onde clones de biblioteca de DNA genômico foram hibridizados com sondas de cDNA de levedura e hifa. Dois clones com aumento de expressão em hifa foram selecionados. O sequenciamento dos insertos destes clones permitiu a identificação de dois genes metabólicos importantes: CaHXT7 (high-affinity hexose transporter) e CaYLL34 (da família AAA ATPase). As ORFs completas destes genes foram caracterizadas e a análise das proteínas hipotéticas revelou que: (1) CaHxt7p tem um domínio de transportador de hexose e (2) CaYll34 tem dois domínios AAA ATPase. Este é o primeiro estudo que demonstra aumento de expressão de genes metabólicos em hifas de C. albicans. Ainda, a associação dos produtos de CaHXT7 e CaYLL34 com a formação de hifas torna estas proteínas potenciais novos alvos para drogas antifúngicas.